Colorazione del DNA

Nella pagina Estrazione del DNA abbiamo parlato del materiale che contiene le informazioni per il funzionamento degli esseri viventi: l'acido desossiribonucleico più comunemente detto DNA, in questa pagina presentiamo il procedimento per colorare il DNA dei nuclei cellulari e, con un po' di fortuna, rendere visibili le fasi della divisione cellulare. Il processo che andiamo a presentare è noto come colorazione di Feulgen dal nome del suo inventore.
Questo procedimento di colorazione è specifico per il DNA, permette quindi di evidenziare i nuclei delle cellule, che si coloreranno di rosso intenso, e, se si userà un materiale in cui siano frequenti le divisioni cellulari, permetterà di vedere i cromosomi delle cellule in divisione.
Per ottenere il materiale da colorare si prenda una cipolla e, 3 o 4 giorni prima di effettuare la colorazione, la si metta su di un bicchiere contenete acqua in modo che sviluppi le radici.
Quando le radici sono lunghe circa 1,5 cm si tagliano a 1 cm dall’estremità e si mettono a fissare per almeno 10 minuti in acido acetico. Si consiglia di effettuare l’operazione verso mezzogiorno, dato che in quel momento della giornata si ha il massimo delle divisioni cellulari.
Si tolgono i pezzi di radice dall’acido acetico e si lavano per 5 minuti in acqua. Si mettono in una provetta con acido cloridrico 1N (8,25%, si può preparare mescolando 68ml di acido muriatico commerciale con 32 ml di acqua distillata) e si mette il tutto in un bagno di acqua a 50 °C per 10 minuti. Questo procedimento serve per demolire l'RNA (acido ribonucleico) presente nel citoplasma e nel contempo per liberare la porzione di DNA responsabile della colorazione che si verificherà in seguito.
Si lava il acido cloridrico 1N freddo e poi in acqua.
Si pone per 20-30 minuti in reattivo di Schiff, questo è costituito da fucsina decolorata a contatto col DNA riacquista la colorazione rossa. Il reattivo di Schiff può essere acquistato già pronto presso i fornitori dei prodotti chimici oppure può essere preparato secondo la seguente ricetta: in un recipiente da 200 cc sciogliere 0,15 g di fucsina basica in 30 cc di acqua distillata calda, lasciar raffreddare e filtrare attraverso carta, aggiungere 4,5 ml di acido cloridrico 1N, aggiungere poi 0,45 g di potassio metabisolfito (K₂S₂O₅), mettere allo scuro per 24 ore. Alla fine di questo periodo la soluzione, che inizialmente era di un vivace color rosso fucsia, sarà divenuta incolore, una volta filtrata sarà pronta all'uso. Per verificare se "funziona" potete mettere in una provetta d'acqua un paio di gocce di soluzione di formalina, aggiungendo una goccia del reattivo la soluzione deve diventare di un intenso colore rosso. Il reattivo così preparato va conservato in frigorifero in una bottiglia di vetro scuro.
Osservando il frammento di radice si vedrà una zona, subito dopo la punta, colorata più intensamente, è la zona in cui avvengono le divisioni cellulari, con una lama ben affilata si separerà questa zona dal resto della cellula, si porrà su un vetrino portaoggetti e si schiaccerà con un secondo vetrino in modo che le cellule si dispongano in uno strato sottile. Si metterà sul preparato una piccola goccia di glicerina e si coprirà con un vetrino coprioggetto.

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